Częstość występowania przeciwciał przeciwko Desmoglein 1 w Endemic Pemphigus Foliaceus w Brazylii cd

Dermatolog zbadał wszystkich pacjentów i normalnych osobników w czasie pobierania próbek krwi. Rozpoznanie selvagemu zostało ustalone zgodnie ze standardowymi kryteriami klinicznymi, histologicznymi i immunologicznymi.1,12 Uzyskaliśmy również próbki surowicy od 126 normalnych osób, które żyły w innych krajach (101 ze Stanów Zjednoczonych [46 Choctaw Indians i 55 innych mieszkańców USA] i 25 z Japonii), 40 hospitalizowanych pacjentów z chorobami nondermatologicznymi i 197 pacjentów z chorobami dermatologicznymi innymi niż na stronie. Spośród tych 197 pacjentów 37 miało pemfigoid pęcherzowy (10 z Japonii i 27 ze Stanów Zjednoczonych), 33 miało opryszczkę ciążową (wszystkie ze Zjednoczonego Królestwa), 25 miało toczeń rumieniowaty układowy (wszystkie ze Stanów Zjednoczonych), 38 miało nieendemiczny forma pęcherzyca foliaceus (10 z Japonii i 28 ze Stanów Zjednoczonych), a 64 miało pęcherzycę zwykłą (10 z Japonii i 54 ze Stanów Zjednoczonych). W przypadku 5 pacjentów z chorobą nowotworową pochodzących z subregionu Lim.o Verde, próbki surowicy uzyskane przed wystąpieniem choroby były dostępne do analizy, a liczne próbki surowicy uzyskano w ciągu pięciu lat od 19 zdrowych osób żyjących w Lim.o Verde podregion był również dostępny.
Protokół badania został sprawdzony i zatwierdzony przez instytucjonalne komitety przeglądowe w Medical College of Wisconsin i University of S.o Paulo w Brazylii. Badania pacjentów i osób zdrowych z rezerwatu Tereza w Lim.o Verde zostały zatwierdzone przez rząd rezerwatu oraz Fundaço Nacional do Indio, uznany przez rząd Brazylii za oficjalną organizację reprezentującą interesy Indii.
Próbki krwi transportowano w ciągu 12 godzin po pobraniu do Universidade Federal de Mato Grosso do Sul w Campo Grande, gdzie surowicę oddzielono i przechowywano w temperaturze -20 ° C. Zamrożone próbki surowicy zostały następnie przetransportowane do Stanów Zjednoczonych, gdzie przeprowadzono wszystkie testy.
Produkcja i oczyszczanie rekombinowanego desmogleinu
Rekombinowaną postać desmogleiny 1, składającą się z całej domeny zewnątrzkomórkowej tego białka desmosomalnego i znacznika histydyny C-terminalnej, wytworzono w układzie bakulowirusowym i oczyszczono metodą chromatografii powinowactwa na niklu zgodnie z procedurą Dinga i in. 16 Optymalne warunki dla układ ten określono empirycznie w sposób opisany przez Liebmanna i wsp.17. Typowa wydajność białka wynosiła 20 .g na mililitr supernatantu hodowli.
Test immunoenzymatyczny
Protokół testu immunoenzymosorbcyjnego (ELISA) został oparty na protokole Ishii i wsp., 18 z następującymi modyfikacjami. Wyrażone w bakulowirusie desmogleiny unieruchomiono na 96-studzienkowych płytkach z polistyrenu powleczonych kwasem niklowo-nitrylotrioctowym (Qiagen, Chatsworth, CA) za pomocą inkubacji przez noc w temperaturze 4 ° C, płytki następnie przemyto roztworem buforowanym TRIS (pH , 7,2) zawierający 3,7 mM wapnia. Duplikaty próbek rozcieńczenia 1: 200 surowicy inkubowano przez 35 minut. Płytki przemywano, a następnie inkubowano z rozcieńczonym 1: 3000 kozim przeciwciałem IgG (Bio-Rad, Hercules, CA) znakowanym chrzanowo-peroksydazą przez 45 minut.
[podobne: odruchy patologiczne, przednerkowa niewydolność nerek, kłykciny kończyste ]
[hasła pokrewne: progresja choroby, bewacyzumab, żołądek przeżuwaczy ]
[hasła pokrewne: jagody goji opinie, olx wschowa, olx sokółka ]