Rekonstrukcja uszkodzonych rogów przez transplantację autologicznych komórek nabłonka limbowego cd

Wypreparowaną tkankę umieszczono na błonie owodniowej w naczyniu o średnicy 35 mm, zawierającym 1,5 ml pożywki hodowlanej (panel B). Po dwóch do trzech tygodni komórki nabłonkowe urosły i rozprzestrzeniły się, tworząc okrągły arkusz komórek o średnicy 2 do 3 cm (panel C). Hodowane komórki nabłonka nabłonka z błoną owodniową przeszczepiono następnie do chorego oka (panele D i E). Biopsję limbocytów wykonano na normalnym oku przeciwnym (patrz rysunek 1). Powiekę sterylizowano powidonem-jodem, a fragment tkanki obwodowej na 2 mm, który zawierał komórki nabłonkowe, a część zrębu rogówki oddzielono od brzegu kończyn dolnych i wycięto z powierzchownego podścieliska rogówki za pomocą lamelarnej keratektomii. Tkankę umieszczono w naczyniu o średnicy 35 mm zawierającym 1,5 ml dodatkowego nabłonka hormonalnego w 5 procentach surowicy płodowej i natychmiast wysłano do laboratorium w celu hodowli. Pożywka składała się ze zmodyfikowanej pożywki Eagle a Dulbecco i Ham F12 (w stosunku 1: 1), uzupełnionej 0,5% dimetylosulfotlenkiem, 2 .g mysiego naskórkowego czynnika wzrostu na mililitr, .g insuliny bydlęcej na mililitr i 0,1 .g cholery toksyna na mililitr.
Nabłonkowe komórki nabłonka hodowano zgodnie z wcześniejszym opisem, z pewnymi modyfikacjami.20,21 Eksplantaty komórek nabłonka obojczyka zaszczepiono na stronie błony owodnej błony podstawnej. Pożywkę zmieniano co dwa dni i hodowlę utrzymywano przez dwa do trzech tygodni, po którym to czasie komórki nabłonkowe urosły i rozprzestrzeniły się, tworząc warstwę komórek pokrywającą obszar o średnicy 2 do 3 cm (Figura 1).
Wyniki histologiczne
Arkusze nabłonka limbowego na membranie owodniowej badano za pomocą mikroskopii świetlnej i elektronowej. Próbki zostały utrwalone i przetworzone przy użyciu standardowych procedur histologicznych. Do mikroskopii świetlnej wycinano skrawki 4 .m i barwiono hematoksyliną i eozyną lub odczynnikiem Schiffa z kwasem nadjodowym i błękitem Alcian. W przypadku mikroskopii elektronowej ultracienkie skrawki badano pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym (Jeol-1200 CX, Jeol, Tokio, Japonia) pod kątem obecności charakterystycznych struktur błony podstawnej.
Transplantacja komórek nabłonka limbocytów hodowanych na błonie owodniowej
Ryc. 2. Ryc. 2. Rodzaje przeszczepów rogówki. W przypadku oczu z uszkodzeniem rany i rogówki, ale z normalną rogówką środkową (panel A), hodowane komórki nabłonka nabłonka wraz z podłożem błony płodowej przeszczepiano na powierzchnię rogówki jako przeszczep sektorowy (białe linie) lub ekwiwalent limbowy (czerwone i białe linie), kształtowane zgodnie z rozmiarem chorego obszaru. W przypadku oczu z uszkodzeniem całej powierzchni rąbka i rogówki (panel B), komórki nabłonka łapy z membraną owodniową przeszczepiono jako prześcieradło w celu pokrycia uszkodzonego obszaru.
Po zabiegu periotomii w rąbku, blizny podspojówkowe okołowierzchołkowe i stany zapalne tkanek zostały usunięte do gołej twardówki. Tkanka rogówkowa rogówki została usunięta za pomocą lerellarnej keratektomii w sposób podobny do opisanego dla transplantacji allograftowej. W przypadku oczu z uszkodzeniem rąbka i rogówki, ale z prawidłową rogówką środkową, komórki nabłonka i błony owodniowej użyto jako sektorową kończynę dolną i przeszczep rogówki lub ekwiwalent limbowy, kształtowany zgodnie z rozmiarem oka biorcy i przeszczepiony do odpowiadającej strefy kończyn dolnych (od 90 do 360 stopni) (ryc. 2A)
[patrz też: objaw hermana, elastopatia u dzieci, kłykciny kończyste ]
[patrz też: mezenchyma, dipirydamol, choroba bostońska u dorosłych ]
[podobne: hipertensjologia, hipokapnia, homocysteina badanie ]